輪狀病毒C型和豬德爾塔病毒雙重熒光RT-PCR檢測試劑盒采用多重熒光PCR技術(shù)，針對輪狀病毒C型（Porcine rotavirus type C，RV-C）和豬德爾塔病毒（Porcine deltacoronavirus，PDCV）兩種常見豬腸道病毒特有的基因序列，設(shè)計不同熒光信號標記的探針，通過熒光信號的變化檢測豬腸道樣本中是否含有上述兩種病毒。
儲存條件及有效期：
試劑盒置于-20℃冰箱中凍存，試劑盒有效期為一年。
試劑盒使用方法：
1）從試劑盒中取出DEPC水、RT-PCR反應(yīng)液、P溶液、陰性和陽性核酸對照，室溫融化，酶混合液置冰箱4℃待用。
2）取待檢樣本（100μL）用Trizol法或柱法或磁珠法提取RNA，并溶解于50 μL DEPC水中。
3）配反應(yīng)體系：試劑使用前，振蕩混勻，3000rpm離心2秒。
在0.2mL平蓋PCR薄壁管或平蓋PCR八聯(lián)管中，按上述體積加入反應(yīng)體系液（陽性和陰性對照管同樣配制，待檢RNA溶液換為試劑盒提供的陽性核酸對照和陰性核酸對照，加樣量分別為3μL），蓋好管蓋，去除管中氣泡，并用離心機甩離，確保所有液體都在管底。將PCR 管放入熒光PCR檢測儀中。質(zhì)控標準
陰性對照的CT值應(yīng)等于None；同時陽性對照的CT值應(yīng)小于等于30。
否則，此次試驗視為無效。（CT值應(yīng)以S型曲線拐點的循環(huán)數(shù)為準）
結(jié)果判定：
1）CT值為None的樣本判定為陰性；CT值小于等于38的樣本判定為陽性。
2）CT值大于38的樣本建議重做。重做后CT值為None判定為陰性，否則判定為陽性。
3）對于某些未呈現(xiàn)S型曲線，但本底較高的樣本，應(yīng)判定為陰性。
