內皮細胞，內皮祖細胞，基質細胞的信號聯系在血管形成的時候是至關重要的。其中，外分泌體就是其中一種通信方式。有研究發現，外分泌體在免疫應答，腫瘤存活，應激反應和血管生成上的細胞間通信有著非常重要的作用。在外分泌體中有mRNA和miRNA往往會對受體細胞產生影響。荷蘭的研究人員對外分泌體內的microRNA miR-214的研究發現，含有miR-214的外分泌體能夠減少受體細胞的內皮細胞的衰老，并且促進血管生成的發生。與此同時，其還會減少毛細血管失調癥突變體 ataxia telangiectasia mutated (ATM)的表達。
研究人員采用毛細血管內皮細胞系（he human microvascular endothelial cell line (HMEC-1)），鋪在基質膠上，采用添加/無外分泌體的培養基培養18小時，對比不同條件下的小管長度。
（一）實驗材料和實驗方法
1）細胞： HMEC-1 (Centers for Disease Control and Prevention, Atlanta, GA) 104 per well
2）培養基： MCDB 131 Medium (Life Technologies)
3）基質膠： Matrigel (ECMatrix, Millipore) 10 µl per well
4）耗材： µ-Slide Angiogenesis, ibiTreat (ibidi, 81506) 1 Slide
5）其他： 細格紙 1 sheet
實驗流程圖：
實驗流程圖，提前將Matrigel融化，鋪于ibidi血管生成載玻片 µSlide Angiogenesis 的下孔中，待膠凝后，將細胞懸液加入血管生成載玻片上孔中，成管后使用顯微鏡觀察。
（二）實驗步驟
1）準備基質膠
① 實驗前一天將Matrigel置于冰盒中，放入4。C冰箱，使膠能過夜緩慢融化。（注意：同樣要準備一些4。C預冷的槍頭用于吸取Matrigel）
② 開始實驗前，將Matrigel始終保持放在冰盒中。
③ 打開滅菌包裝，取出ibidi血光生成載玻片 µ-Slide Angiogenesis。
④ 每孔中加入10μl Matrigel。注意槍頭要垂直于內孔的正上方加入Matrigel，防止有Matrigel流經上孔而留下殘留膠。
怎么知道加了合適體積的Matrigel：
由于Matrigel流動性不強，并且有可能移液槍不準確，有可能10μl的膠不能填滿ibidi血管生成載玻片的下孔，這樣，必然會影響到實驗的成像結果。這時用一張格子紙就能知道移液槍調整到多少能正好把下孔填滿。
如上圖所示，垂直透過每個孔看下面的格子紙，如果格子被縮小了，那么就說明膠沒加滿，格子被放大了，那么膠就加多了，格子沒發生什么變形，這才是剛剛加滿下孔的狀態。
2）凝膠
① 蓋上ibidi血管生成載玻片的蓋子。
② 準備一個10cm的培養皿，放入浸過水的紙巾，制成一個濕盒。
③ 將ibidi血管生成載玻片放入培養皿中，蓋上培養皿蓋。
④ 將整個培養皿放入培養箱中，靜置30分鐘左右，等待膠凝結。
⑤ 等待同時準備細胞懸液。
3）鋪細胞
加入細胞的量直接影響實驗結果，所以在正式實驗開始之前，要對不同類型的細胞和使用數量進行預實驗。獲得較好比例的細胞密度。使用HMEC-1細胞，每孔種10000個細胞即可。
① 準備密度為2*105cells/ml的細胞懸液，充分混勻。
② 將膠已經凝固的ibidi血管生成載玻片從濕盒中取出。
③ 每孔加入50μl的細胞懸液，注意保持槍頭垂直在上孔的上方，不要接觸下孔的凝膠?？梢允褂门艠?。
④ 同樣用格子紙查看是不是加了足夠量的液體，如果沒有，加入無細胞的培養基，使上孔液體正好加滿。
⑤ 蓋上蓋，靜置，一段時間后，所有細胞都會沉下去落在Matrigel的表面。
4）不同培養基處理
采用無處理基礎培養基（basal,-），培養了HMEC-124小時后收集的培養基（cond,comp.）和在基礎培養基中加入了分離出來的外分泌體的培養基（basal,+)分別加入血管生成載玻片中，37℃，培養18小時。
5）采集圖像并統計結果
可以按照細胞的生長速度定時采集圖像，并且對其成管長度測量和記錄，并且對其進行統計分析。
三）實驗結果
結果可見，18小時后，分別測量3組實驗結果的血管長度，統計后發現，加入外分泌體的基礎培養基和培養HMEC-1細胞24小時后收集的培養基的成管長度，顯著長于純的基礎培養基中的HMEC-1細胞的成管長度。說明，外分泌體對血管生成有著顯著的促進作用。
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