2019年12月以來，新型冠狀肺炎疫情仍在肆虐。國家對新型冠狀肺炎以及相關的病媒生物威脅公共安全加大投入力度，各地疾控中心也開始病媒生物研究篩選預防工作。在我國法定報告的傳染病中有許多屬于病媒生物性傳染病，如鼠疫、流行性出血熱、鉤端螺旋體病、瘧疾、登革熱、地方性斑疹傷寒、絲蟲病等；而一些消化道傳染病則通過病媒生物的機械性傳播在人群中擴散，如痢疾、傷寒等。  病媒生物性傳染病是人類共同面臨的嚴峻挑戰之一。通過對病媒生物的有效控制，可以減少它們對人群的騷擾和經濟損失，更可以預防和控制病媒生物性傳染病的發生和傳播。加強病媒生物疾病預防控制已成為一個迫切的任務。安徽省疾病預防控制中心毒理科做病媒生物實驗時，就使用上海凈信JXFSTPRP-CLN冷凍研磨儀。 實驗背景：鼠類不僅傳播鼠疫、流行性出血熱、鉤端螺旋體病、斑疹傷寒等多種疾病，嚴重危害人類健康;而 且通過嚙咬、盜食、污染等方式給工業、農牧業生產等造成直接或間接的經濟損失。 一、材料和方法 樣品來源于居民區及收治醫院周 圍 環 境 采 集 目 標 病 媒 生 物。160份鼠肺樣品來自本地，15份蜚蠊體表擦拭子來自安徽等地。所有樣品均凍存于-80攝氏度待檢。 二、儀器及試劑 1、上海凈信冷凍研磨設備 2、熒光定量PCR分析儀 3、病毒濃縮試劑盒 4、巢式RT-PCR所采用的引物，一步法RT-PCR試劑盒 5、RNA提取試劑盒 三、 實驗方法 1、樣品RNA的提取 別取待檢鼠肺組織于全自動樣品冷凍研磨儀充分再加入異硫酸氰胍溶液，充分溶解后于-20℃保存，備蜚蠊體表擦拭子中加入無菌生理鹽水少許于4℃中過夜，擠壓后取出棉拭子，將剩余液體離心5min，其上清液則用病毒濃縮試劑盒進行濃縮，濃縮所得的晶體中再加入異硫酸氰胍溶液，充分溶解后于-20℃保存備用，按照試劑盒的說明 從樣品的異硫酸氰胍溶液中提取提取所得的RNA保存備用。 樣品研磨前后：  對樣品的實驗步驟： 1、準備全自動樣品冷凍研磨設備。 2、金屬適配器，以及鋼珠適配器。 3、將老鼠組織剪碎，放入研磨管，加入鋼珠。 4、將適配器裝入凈信研磨儀中，開啟低溫功能保持溫度。 5、設定參數，啟動儀器至研磨程序結束，可得到如圖所示樣品。 實驗應用儀器介紹：  上海凈信JXFSTPRP-CLN冷凍研磨儀是一種快速、高效、制冷的研磨系統。它能在非常短的時間內將土壤、植物和動物的組織/器官、細菌、酵母、真菌、孢子、古生物標本等樣品完成研磨、粉碎、混合機細胞破壁。廣泛應用于生命科學、醫藥、生化、環境、地質、農業、林業、質檢、材料等領域。 |
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